在2010版GMP對確認和驗證的定義是：證明任何操作規程（或方法）、生產(chǎn)工藝或系統能夠達到預期結果的有文件證明的一系列活動(dòng)。

為了深入細致了解驗證，今天我們將單獨講解驗證中清潔驗證的檢驗方法。從而確保清潔驗證的目的。

1. 清潔驗證的檢驗需要建立專(zhuān)門(mén)的檢驗方法

原因如下：

① 檢驗的內容是殘留物，因此檢驗的限度值、線(xiàn)性范圍，都與產(chǎn)品的檢驗很有大的區別。

② 如果是外來(lái)污染物（如清潔劑），需要開(kāi)發(fā)專(zhuān)門(mén)的檢驗手段。

③ 如果活性成分在清潔過(guò)程中發(fā)生降解，那么原有的方法可能就不再適用。

2. 檢驗方法建立的所需前提

① 確定清潔方法，包括具體的清潔工藝或清潔SOP。

② 確定取樣方法，因為不同的取樣方式會(huì )對檢測結果造成干擾。

③ 最重要的一點(diǎn)，確定殘留物及限度標準，圍繞殘留的性質(zhì)和殘留限度的大小來(lái)選擇合適的檢驗方法。


 

1. 分析方法的選擇會(huì )受到實(shí)際情況的限制，選擇的出發(fā)點(diǎn)是該方法能滿(mǎn)足預期的目的。

2. 開(kāi)發(fā)新的分析方法是，應考慮開(kāi)發(fā)新的方法需要時(shí)間、人力、儀器成本。建議首先選用現有的分析方法，或對現有方法的限度之進(jìn)行調整。比如：藥典、藥企的內控方法。

3. 要考慮到清潔工藝的干擾，如使用清潔劑，要包括對特定成分殘留的檢測，尤其是當清潔劑的PH值變化較大的，還要考慮到清潔劑對活性成分的影響。

4. 還需考慮取樣過(guò)程的影響，如使用棉簽擦拭時(shí)，需考慮方法的適用性，棉簽的干擾，棉簽對回收殘留物時(shí)的回收率的影響。

5. 但設備表面取樣時(shí)的回收可能低于100%時(shí)，需進(jìn)行適當的校正，以確保檢驗方法的限度要求能夠達到。

6. 對特定的成分，還要考慮取樣至檢測的時(shí)間間隔，應評估貯存條件（時(shí)間、溫度、貯存的小瓶等）對樣品穩定性的影響。

7. 如果活性成分在清潔過(guò)程中產(chǎn)生降解，還要考慮到對降解產(chǎn)物的分析，或采用一些非專(zhuān)屬性的方法。

清潔驗證的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)是確定殘留限度，這里的殘留通常是指“產(chǎn)品殘留”（活性成份）的分析方法驗證。

通常情況下，清潔驗證的方法驗證與常用的方法學(xué)驗證一樣。

應按照《中國藥典》附錄9101進(jìn)行，參照“雜質(zhì)測定”中定量或限度的方法進(jìn)行驗證，包括準確性、精密度、專(zhuān)屬性、線(xiàn)性和范圍，以及定量限和檢測限等內容，需要注意以下方面：

① 準確性和精密度的驗證通常只需要在殘留限度范圍進(jìn)行，一般為殘留物限度的50%-150%，綜合回收率不低于75%，回收率的RSD應不大于10%。

② 定量限和檢測限必須低于樣品的可接受限度，而且最好是遠低于可接受限度，以確保清潔程序的耐用性。定量限通常達到限度標準的1/10，定量要求低于通常儀器分析的要求。

③ 專(zhuān)屬性方法應關(guān)注可能只有在清潔工藝中使用到的其他物質(zhì)（例如清潔劑）可能帶來(lái)的干擾。

通常內毒素檢驗方法都是藥典方法，不需要進(jìn)行正式的驗證，但需要確認其適用性。

經(jīng)批準的微生物檢驗方法也不需要額外的方法驗證。

制藥企業(yè)GMP管理指南中提到“分析方法驗證方案可以只包括殘留物溶液的驗證，也可以包括取樣回收率研究，盡管取樣回收率研究可以獨立于分析方法驗證而單獨進(jìn)行”。

但同時(shí)會(huì )用取樣回收率實(shí)驗（一般是用于擦拭法）來(lái)代替方法學(xué)驗證，這是不全面的，因為這二者還是有區別的。

原因如下：

① 清潔驗證最關(guān)鍵的是要“防止出現假陰性的情況”，可能是分析方法的靈敏度不夠；

② 也可能是取樣操作造成干擾， 或者回收率過(guò)低，影響因素較多。

從時(shí)間順序上來(lái)說(shuō)，應該是先做方法學(xué)驗證，確認方法的可靠性后再進(jìn)行取樣回收率實(shí)驗。（相對于方法學(xué)驗證，回收率實(shí)驗是對取樣方法的驗證）

二者關(guān)注的范圍也不同，分析方法的回收率范圍一般為定量限至限度標準（或120%），是為了確認檢驗方法有足夠的靈敏度。

而回收率的范圍一般在限度標準之上，是為了保證取樣操作的可靠性，在清潔不徹底時(shí)能夠有準確的取樣量。

同時(shí)，二者也有關(guān)聯(lián)，要考慮到取樣回收率對分析方法的影響，如果回收率低于100%時(shí)，分析方法的限度標準要經(jīng)過(guò)系數的較正，也要考慮檢測限/定量限是否能夠達到要求。