利用細胞評價(jià)供試品增強皮膚屏障功效

【評價(jià)原理】

皮膚屏障主要由角質(zhì)層、結構性脂類(lèi)和皮膚脂膜構成，皮膚屏障功能是皮膚的基本生理功能，包括滲透屏障，抗氧化屏障，抗菌屏障，UV屏障，機械屏障等，起保護機體內各組織器官免受外界有害侵襲以及保持機體內環(huán)境穩定的作用。內外源壓力條件，如衰老、炎癥、UV等都會(huì )導致角質(zhì)層的角質(zhì)細胞以及各種脂質(zhì)的組分、結構發(fā)生變化，從而導致皮膚屏障功能的降低。

與皮膚屏障功能密切相關(guān)的蛋白有FLG(filaggrin絲聚合蛋白)、TGM1(transglutaminase 1 轉谷氨酰胺酶1)等。FLG是一種重要的表皮結構蛋白，對角質(zhì)層的結構和功能起著(zhù)至關(guān)重要的作用。FLG及其降解產(chǎn)物有助于皮膚水化、pH平衡、表皮屏障完整性和微生物防御。FLG缺乏會(huì )造成自然保濕因子(NMF)水平下降，導致角質(zhì)層水合作用減少，經(jīng)表皮水分流失(TEWL)增加，皮膚干燥。TGM1基因是表皮表達的三種TGM的主要亞型，TGM1編碼與膜相連的鈣依賴(lài)性硫醇酶，TGM 是一種催化?；D移反應的酶，為球狀單體蛋白，能夠催化肽鏈上谷氨酰殘基的γ－?；w與Lys 殘基的ε－氨基反應，生成ε ( γ－Gln)－Lys 肽鍵, 從而使蛋白分子間或分子內發(fā)生交聯(lián)，這種交聯(lián)較穩定，可以抵抗蛋白酶的水解作用，是角質(zhì)形成細胞終末分化組成角質(zhì)包膜的關(guān)鍵步驟，是皮膚屏障功能的物質(zhì)基礎。

將受試物作用于永生化角質(zhì)形成細胞HaCaT后檢測上述三種基因及蛋白的表達，可以評估供試品增強皮膚屏障的功能。

【實(shí)驗方案】

接種6孔平板： 6×105個(gè)細胞/孔培養（37℃、5%CO2、24h）觀(guān)察細胞貼壁以后，去除培養液，用1mL D Hanks輕柔沖洗細胞一次或兩次。給藥，分別設置空白組、陽(yáng)性對照組（加50和100μm的WY14643，WY 14643是一種過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體PPARα激動(dòng)劑，其對角質(zhì)形成細胞通透性屏障穩態(tài)相關(guān)功能如上調表皮分化相關(guān)分子和脂質(zhì)合成的有益作用已被證實(shí)），按上述條件培養24h。提取總RNA，使用cDNA提取試劑盒，合成cDNA，最后利用RT PCR進(jìn)行檢測。

評價(jià)指標

TGM和FLG基因的表達

【結果展示】

1、TGM和FLG基因的表達柱狀圖（略）

評價(jià)結論

1、供試品可有效促進(jìn)TGM和FLG基因的表達，說(shuō)明該供試品具有增強皮膚屏障功效。